Limites de confianza para el Metodo de Recuento de Coliformes por Filtracion por

Membrana usando 100 ml de muestra : 95 %

Calculos :

Coliformes /100 ml = N ° Colonias x 100

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ml muestra filtrada

Se informa el crecimiento de mas de 200 colonias por placa como TNTC

Verificacion: Colonias con brillo metalico pueden ser producidas por organismos no-coliformes.Colonias atipicas(rojo oscuras o nucleadas sin brillo) pueden ocasionalmente ser coliformes

Es recomendable la verificacion de ambos tipos.

Se verifica por fermentacion de lactosa en caldo lauril sulfato .

Test rapido: por las reacciones de la citocromo oxidasa y ONPG

Seleccion de volumen de muestra:

Una muestra ideal dara entre 50 y 200 colonias de todos los tipos en una superficie de filtro de membrana.

Filtracion de la muestra:

Utilizando pinza esteril colocar una membrana cuadriculada esteril, con la cuadricula hacia arriba sobre la placa porosa del receptaculo. Colocar cuidadosamente el embudo y ajustar. Filtrar bajo vacio parcial. Con el filtro en su lugar, enjuagar el embudo con 20 ml de agua destilada esteril si el volumen filtrado es menor de 10 ml. Una vez filtrado se remueve la menmbrana con pinza esteril, y se coloca sobre un pad esteril adsorbente embebido con 1,8 a 2 ml de medio M-Endo esteril

Incubar los filtros, sin invertir las placas, 24 hs a 35 +/- 0,5 ° C en una atmosfera de por lo menos 90 % de humedad relativa

Control: Filtrar 100 ml de agua destilada esteril despues de una serie de 10 muestras para chequear por una posible contaminacion cruzada. Incubar el control en las mismas condiciones que la muestra.

Usar unidades de filtracion esteriles al comienzo de cada serie de filtraciones. Una serie de filtracion se considera interrumpida si transcurren mas de 30 min entre filtraciones.

Descontaminar el equipo usando luz ultravioleta por 2 min., por vapor fluente, o con agua hirviendo 5 min.

RECUENTO : para determinar el numero de colonias usar una lupa 10 x con fuente directa de luz.Las colonias coliformes tipicas son de color rosa a rojo oscuro con supervicie brillo metalico. El area brillosa puede variar desde un tamano pequeno a cubrir ltoda la colonia.